Quy trình thử nghiệm CAMP

Quy trình thử nghiệm CAMP

Quy trình hướng dẫn làm thử nghiệm sinh yếu tố CAMP của một số vi khuẩn dành cho những bạn sinh viên Y dược chuyên ngành xét nghiệm vi sinh. Vậy Quy trình thử nghiệm CAMP gồm những bước nào?

• Quy trình thử nghiệm Optochin trong phòng thí nghiệm
• Quy trình kỹ thuật xét nghiệm: thử nghiệm “vệ tinh” của vi khuẩn
• Quy trình thử nghiệm bacitracin được thực hiện như thế nào?

Quy trình thử nghiệm CAMP là gì?

Giảng viên Cao đẳng Xét nghiệm, cô Nguyễn Yến (Trường Cao đẳng Y Dược Pasteur Hà Nội) chia sẻ đến bạn đọc quy trình hướng dẫn làm thử nghiệm sinh yếu tố CAMP như sau:

Phạm vi áp dụng của thử nghiệm sinh yếu tố CAMP

Quy trình này được áp dụng ở Khoa/Phòng/Bộ phận vi sinh của những Bệnh viện.

Nguyên tắc làm thử nghiệm sinh yếu tố CAMP

Streptococcus agalactiae tạo ra một loại protein chịu nhiệt, ngoài tế bào, có thể khuếch tán, tác động hiệp đồng với yếu tố tiêu huyết beta (beta-lysin) do Staphylococcus aureus sản xuất ra để tạo thành một vùng ly giải trong môi trường chứa hồng cầu cừu hoặc bò

Trang thiết bị, vật tư cần có trong thử nghiệm sinh yếu tố CAMP

Trang thiết bị

• Tủ ATSH cấp 2
• Kính hiển vi quang học.
• Máy ly tâm
• Máy trộn, lắc
• Ống vô trùng có nắp đậy.
• Đèn cồn, que cấy, lam kính, coverslip bút viết kính, dầu soi kính, giấy thấm dầu.
• Pipet Pasteur vô trùng.

Sinh phẩm hóa chất

• Chủng aureus ATCC 25923
• Thuốc thử thương mại:

+ Khoang giấy chứa beta-lysin của S. aureus (số SS697; Remel, Inc.): Bảo quản ở 4C.

+ Thuốc thử dạng dung dịch CAMP nhỏ giọt (số Z206; Hardy Diagnostics)

Quy trình thử nghiệm CAMP khi nào cần thực hiện?

Kiểm tra chất lượng thử nghiệm sinh yếu tố CAMP

• Những hóa chất được kiểm tra theo Quy trình kiểm tra chất lượng trên Y học lâm sàng về sinh phẩm, hóa chất, lưu lại kết quả sau khi kiểm tra.
• Chứng:

+ Chứng Dương: Streptococcus agalactiae ATCC 12386

+ Chứng Âm: Streptococcus pyogenes ATCC 19615

An toàn trong thử nghiệm sinh yếu tố CAMP

• Làm thao tác với mẫu bệnh phẩm trong tủ ATSH
• Dùng những thiết bị bảo hộ cá nhân.

Làm thử nghiệm sinh yếu tố CAMP

Phương pháp chuẩn

• Cấy aureus ATCC 25923 theo một đường thẳng ở giữa đĩa thạch.
• Ria chủng vi khuẩn chưa biết theo một đường thẳng vuông góc với đường cấy aureus nhưng không chạm vào đường đó.
• Ria chủng làm chứng dương song song và nhữngh đường ria chủng cần xác định khoảng 2,54 cm.
• Đề tên mỗi đường ria vào mặt sau của đĩa.
• Ủ đĩa qua đêm ở 35 độC trong tủ ấm có CO₂.

Phương pháp dùng khoanh giấy

• Đặt khoanh giấy chứa betalysin trên thạch máu đã làm ấm.
• Ria chủng vi khuẩn nhữngh bờ khoanh giấy khoảng 2-3 mm.
• Ủ đĩa qua đêm ở 35 độC trong tủ ấm có CO2.

Thạch máu được sử dụng thử nghiệm CAMP

Phương pháp nhỏ giọt nhanh

• Nhỏ 1 giọt thuốc thử (hoặc lấy bằng ăng đầy 10µl) cạnh khóm của agalactiae trên thạch máu. Dung dịch có thể chạm vào khóm.
• Ủ đĩa (nắp ở trên) để tránh giọt thuốc thử chạy ngang qua mặt đĩa, trong 20 phút ở 35 độ
• Kiểm tra bằng đèn soi xem có vùng tiêu huyết cạnh khóm không.
• Ủ lại 30 phút tình huống phản ứng ban đầu âm tính. Dùng kính lúp, tình huống cần, để quan sát đĩa.
• Có thể để tủ lạnh sau khi ủ để thúc đẩy phản ứng.

Diễn giải kết quả thử nghiệm sinh yếu tố CAMP và báo cáo

• Kết quả dương tính trong phương pháp thử nghiệm CAMP chuẩn: có khoảng tiêu huyết hình đầu mũi tên ở chỗ giao giữa đường ria của aureus và chủng cần xác định sinh yếu tố CAMP.
• Test CAMP đảo ngược hoặc phospholipase D dương tính: Có khoảng không tiêu huyết hình mũi tên ở chỗ giao cắt của 2 chủng tiêu huyết.
• Tình huống dùng khoanh giấy, kết quả dương tính xác định khi có vùng tiêu huyết hoàn toàn hình trăng lưỡi liềm/hình cung ở chỗ giao giữa beta-lysin và chủng cần xác định.
• Trong test giọt nhỏ nhanh, sự xuất hiện của vùng tiêu huyết rộng ra ở những nơi thuốc thử thấm vào là dương tính.
• Không có vùng tiêu huyết mở rộng ra xung quanh khóm thì phản ứng là âm tính.

Nguồn: QĐ số 1539/QĐ-BYT ngày 20/4/2017 của Bộ trưởng Bộ Y tế

Được Y sĩ đa khoa tổng hợp hướng dẫn các kỹ thuật xét nghiệm